Bio Abitur
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Gentechnische Methoden

PCR, Gelelektrophorese, Southern Blot, CRISPR/Cas9 – für das Abitur

Was ist PCR? (Polymerase-Kettenreaktion)

Die PCR ist eine Methode zur exponentiellen Vervielfältigung (Amplifikation) eines bestimmten DNA-Abschnitts in vitro. Sie wurde 1983 von Kary Mullis entwickelt (Nobelpreis 1993). Mit PCR kann man aus winzigen DNA-Mengen (z.B. Tatortspuren, alte Knochen) Millionen Kopien herstellen.

PCR-Zyklus – interaktiv
PCR-Zyklus (Zyklus 0 von 30–40)1. Denaturierung94–96°C · 30 Sek.DoppelhelixAbkühlen2. Primer-Anlagerung50–65°C · 30 Sek.Erwärmen3. Elongation72°C · 1 Min./kbExponentielle Vermehrung: 2ⁿ Kopien nach n ZyklenZyklus 1: 2 Kopien | Zyklus 10: 1.024 | Zyklus 20: 1.048.576 | Zyklus 30: ~1 Milliarde Kopien!Z1Z2Z3Z4Z5Z6Z7Z8Z9Z10Benötigte Komponenten:• DNA-Matrize (Template) • Primer (kurze Oligonukleotide, ~20 bp, flankieren den Zielbereich)• Taq-Polymerase (hitzestabile DNA-Polymerase aus Thermus aquaticus) • dNTPs • Pufferlösung • MgCl₂

Die 3 Schritte eines PCR-Zyklus

1
Denaturierung (94–96°C, 30 Sek.)
DNA-Doppelhelix wird aufgetrennt
2
Primer-Anlagerung / Annealing (50–65°C, 30 Sek.)
Primer binden spezifisch an die Zielsequenz
3
Elongation / Extension (72°C, 1 Min./kb)
Taq-Polymerase synthetisiert neue DNA-Stränge
Anwendungen der PCR – Abiturrelevant!
Forensik

DNA-Fingerabdruck aus Tatortspuren (Haare, Blut, Speichel) → Täteridentifikation

Medizin

Nachweis von Krankheitserregern (z.B. COVID-19 PCR-Test, HIV-Diagnose)

Genetische Diagnostik

Nachweis von Erbkrankheiten (z.B. Mukoviszidose, Huntington) vor oder nach der Geburt

Evolutionsforschung

Analyse alter DNA aus Fossilien (z.B. Neandertaler-Genom)

Gentechnik

Herstellung von DNA-Fragmenten für Klonierung, Sequenzierung, Gentherapie

Vaterschaftstest

Vergleich von DNA-Profilen (STR-Analyse) zur Verwandtschaftsbestimmung

RT-PCR (Reverse Transkriptase-PCR)

Variante der PCR, bei der zuerst mRNA in cDNA (komplementäre DNA) umgeschrieben wird, bevor die PCR durchgeführt wird. Wird genutzt, wenn man die Genexpression untersuchen will (welche Gene werden in einer Zelle aktiv transkribiert?).

mRNA→ Reverse Transkriptase →cDNA→ PCR →Amplifikat

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